Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失呼吸道诱发到消失1DF癌症流行病学症状的令人满意率在青少年中后期就有很好的描绘，多个呼吸道诱发感染性的青少年里面有70%在血清转换后10年内肺结核癌症，而随访15年的青少年这一百分比增大到84%。相对来说之下，占多数流行病学1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的肺癌机制还从未给予充分的研究者。

越来越多的人开始采用理应于系统来定义1DF癌症的令人满意：群锥体在消失多种呼吸道诱发时转至第1期中，消失皮质醇异常时转至第2期中，消失症状时转至第3期中。一些多发呼吸道诱发感染性的群锥体，在1期和2期，令人满意较慢速，并蓬勃发展为肺癌的1DF癌症。我们先前描绘了一第三组在首次样品到多种呼吸道诱发样本后非常少10年无癌症的极快令人满意者，这第三组病人总数少，但外观上非常明确。随后，我们发现呼吸道自身肝细胞特异性CD8+T细胞内重排在令人满意极快的病人里面大锥体上不共存，但在近期肺癌和长期共存的癌症病人里面很非常容易样品到。这似乎证明，与令人满意病人相对来说，这些病人诱发的通气减弱。

一时期研究者证明，尽管通气性T细胞内(Treg)数量但会，但癌症病人共存一些功用缺陷，其里面包括对IL-2的重排能力减小。此外，癌症病人里面的畸变CD4+T细胞内似乎对通气更具抵抗性，展现出为畸变T细胞内的减缓消退，连续性转化成的Treg和锥体外转化成的游离Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞内里面IL-2重排消退。本研究者的目的是描绘了CD4+通气性T细胞内(Treg)在一小群极极快令人满意者里面的外观上，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以一些人为基础的纵向研究者，在21岁以下发病的病人亲属里面检查1DF癌症的危险因素。我们先前描绘了长期极快令人满意者的外观上，他们保持多重呼吸道诱发感染性少于10年，但从未消失癌症的流行病学症状，慢速性或非完成性诱发。随后，10名继续保持无癌症并愿意提供大量血液样本的极快令人满意者纳入T和B细胞内功用比对。在现在的研究者里面，8名慢速令人满意者(SP第三组)，里面位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的呼吸道诱发感染性。所有的参与者都处于1DF癌症令人满意的1期，尽管一些人随后耗尽了呼吸道诱发对某些肝细胞的感染性重排，然而，一名病人仍然处于2期非常少6年，但从未消失流行病学症状，一名病人被确诊为癌症，该受试者72岁，在挖掘实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在科研人员里面对该丝氨酸完成了单独评核。分开外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多变量流式细胞内忍术和T细胞内减缓试验评核丝氨酸里面Treg的振幅、表DF和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、举例来说和转回)完成无委派聚类比对，评核Treg表DF。

结果：与卫生丝氨酸相对来说，来自慢速令人满意锥体的梦境CD4+T细胞内的委派聚类推断，诱导着的梦境CD4+ Treg振幅增大，与减缓作用游离的TNFR相关细胞内(GITR)对此增大有关。一名HbA1c急剧下降的病人与令人满意极快者和匹配的相符合第三组相对来说，Treg谱各有不同。功用比对证明，与卫生丝氨酸相对来说，来自极快令人满意锥体的Treg介导的CD4+畸变T细胞内减缓明显受损。展现出为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134对此的减缓增大。

布1 熟悉的表DF比对推断，CD4+Treg亚DF在慢速令人满意队列里面增大。由FlowSOM降解的Treg三楼，聚集地在来自所有丝氨酸的活着CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示出物对此核对出10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个不同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个结点代表一个战斗群(100个战斗群)，较小的元战斗群(10个元战斗群)在结点第三组一处上色。每个结点里面的饼布对此单个标示出的对此档次。(b)每个元聚类的热布，以推断整锥体标示出对此。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)降解布，以及FlowSOM定位的每个元簇的沙质。(e-l)相对原子量为每个metacluster箱支线布(原子量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。黄色橘色代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的实测证实，Treg振幅的增大是令人满意极快的标志。分级相关联(a - f)和橄榄比对(g-k)相对来说较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR对此完成分开，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(白斑)第三组以及丝氨酸SP 606(黄色)里面CD25+ cd127的振幅概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联三子集的箱支线布;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此准确度着色，箭头引人注意的簇被定位为SP和HD队列间的不同。(j)箱支线布推断了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组里面，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对原子量(百分比)。(k)灰度推断每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示出相对对此与文化背景对此(紫色);上列，内核Treg_3;请注意动身，内核Treg_4。文化背景与所有其他簇里面标示出的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

布3 与卫生献血者相对来说，令人满意极快者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个对此标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的对此热布(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里面所有HD(紫色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR对此串联，推断灰度(c)和概述布(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR对此，从分级相关联，从所有HD(紫色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)串联，推断灰度(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

布4 来自极快令人满意的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的能力减小。SP第三组用紫色的支线和橘色对此，HD第三组用黑色的支线和橘色对此，黄色的支线/橘色对此丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标示出为CFSE, Treg按辨别的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3天后完成流式细胞内忍术样品。(a-d)与CD4+；也者相对理应的treg指导(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。采用感染性相符合(诱导着的响理应细胞内则有treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对来说较测试

布5 畸变CD4+T细胞内对极快令人满意的T细胞内再造的减缓更敏感。SP第三组用紫色的支线和橘色对此，HD第三组用黑色的支线和橘色对此，黄色的支线/橘色对此丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示出，treg按辨别的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，指导3天后完成流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者都由指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里面的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对来说较测试

结论：我们证明了的结论是，来自极快令人满意三子的再造梦境CD4+Treg在GITR对此里面给予了扩展和充沛，重申了进一步研究者Treg在1DF癌症风险群锥体里面的异质性的必要性。

中文翻译注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28